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消毒和滅菌(jun1)是微生物實驗技術中最(zuì)基本的操作技術,因此從事藥品生產、檢驗的人員均應了(le)解消毒(dú)和滅菌的基本(běn)概念、兩者(zhě)的關(guān)係,各自的應用方法(fǎ)及其(qí)意義,操作時應嚴格執行相關的操作規程,一方麵確保(bǎo)生產與檢驗(yàn)工作的效果,另一方麵也(yě)是對自身安全的保護。
消(xiāo)毒和滅菌的概念:
1、消毒:指對病原微生物的繁殖體的致死作用,但不能殺死芽孢等全部微生物,因此消毒是不徹底的,不能(néng)代替滅菌。凡用於消毒的(de)化學藥品稱為消毒劑(jì),因此人們也常稱消(xiāo)毒劑為(wéi)化(huà)學消毒劑。
2、滅菌:殺滅物體中所有活的微生物(含(hán)芽孢(bāo))的作用,滅菌是采用強烈的理化因素使任何物體內外部的一切微生(shēng)物永遠喪失其(qí)生長繁殖能力的措施。通常用物理方法(fǎ)來(lái)達到滅菌的目的。
二(èr)、消毒和滅菌的關係
1、共(gòng)性:殺滅微生物以控製其汙(wū)染和防止傳播。
2、區別:
三、消毒和滅(miè)菌的應用(yòng)
1、消毒
1)消毒劑(jì)分類
依殺(shā)滅微生物能力進行(háng)分類,有以下三種:
2)消(xiāo)毒劑的選擇
消毒劑(jì)的種類很(hěn)多,性質不一(yī),因此應(yīng)根據實際需求選擇既安全又有效的消毒劑。在選擇時至少應考慮以下幾點:
3)消毒劑的使用
A、影響消毒效果的因素
影響消毒劑效能的(de)因素比較複雜,一般都因(yīn)消毒劑的種類而異,因此各種消毒劑使用時應注意(yì)以下因素
a)微生物種類及(jí)數量
消毒劑的(de)有效(xiào)濃度及(jí)作用時間因微(wēi)生物的種類(lèi)及數量的不同而有差異(yì),不同類型的病(bìng)原微生(shēng)物對消毒(dú)劑的抗力不同。對於細菌(jun1)繁殖體來說(shuō),革蘭氏陰性菌(jun1)比革蘭氏(shì)陽性菌對消毒劑的耐受性強(qiáng),尤其是銅綠假單(dān)胞菌的耐受性較強;芽(yá)孢的耐受力最強,在(zài)化學(xué)消毒劑中,戊二醛和過氧乙酸可殺滅芽孢,但其作用力不(bú)如熱力滅菌方法(fǎ);病(bìng)毒對消毒因子的耐力也因(yīn)其種類的不同而有(yǒu)相當大的差異(yì),親水病毒的耐力(lì)較親脂病毒要強;真菌對大多數(shù)化學藥物的耐受力較強,因此適用(yòng)於細菌的消毒劑並不一定適用於真菌,但真菌一般耐熱性較(jiào)差。微生物汙(wū)染數量多時,應加長消毒接觸時間、加大消毒劑用量或提高消毒劑濃度。
b)溫度(dù)
一般來說,消毒的速度隨溫度的提高而加快,其殺菌作用也相應增強。溫(wēn)度影響的(de)原理是其可影響(xiǎng)菌體表麵和酶係統的活性(xìng),以及(jí)消毒劑的分子運動,使得消(xiāo)毒劑與菌細胞接觸的機會增加,從而使消毒的時間縮短。但溫度的(de)變(biàn)化對各種消毒(dú)劑的影(yǐng)響不同,如醇類和(hé)酚類一般受溫度影響較小(xiǎo),但(dàn)如甲醛、環氧乙烷等溫度(dù)升高一倍時,其殺菌效果可增加十倍(bèi)。
c)濃度
消毒劑的(de)濃度應(yīng)考慮的是其主要成(chéng)分的濃度,根據不(bú)同類型的(de)消(xiāo)毒劑性質,提高或降低濃度,均可顯著影(yǐng)響消毒效果。一般降低消毒劑的(de)濃度需延長相應的消毒(dú)時間,且消毒劑內的有效成分在其保存期內也會相應下降。
d)pH值
酸堿度常影響(xiǎng)酸性或堿性消毒劑的電離度,改變其溶解(jiě)度及分子(zǐ)結構,影響不同離(lí)子型(xíng)消毒劑的作用,在堿性環境中,細菌表麵負電(diàn)荷(hé)增多,陽離子型消毒劑作用較強(qiáng),在酸性環境(jìng)中(zhōng),細菌表麵負電荷減少,陰離子型消毒(dú)劑的殺菌效果較好;另外pH的過高或過低對微(wēi)生(shēng)物(wù)的生長及表麵物理化學(xué)狀態均有(yǒu)影響。
e)有機物質
消毒環境中存在有機物,則其(qí)可在微生物表麵形成保護層(céng)阻礙消(xiāo)毒劑與微生物的(de)接觸或延遲消毒劑的作用,可能導(dǎo)致微生物逐漸產生對藥物的適應性,這些情(qíng)況均會不同程度的(de)降(jiàng)低消毒劑的消毒作用,如有機物可中和一部分消毒劑,有機物和消毒劑(jì)作(zuò)用,形成溶解度比原來更低或殺菌(jun1)作(zuò)用比(bǐ)原來更弱的化合物。一般來說消(xiāo)毒劑中的重金屬類(lèi)及(jí)表麵活化劑等受有機物的影響較大。
B、其他注意點
a)微生物對消毒劑的耐受性
一般來說,為了避免微生物對消毒劑(jì)的耐受性,很多企業的消毒(dú)劑是輪換使用的,現今(jīn)在學術(shù)界(jiè)對於消毒劑的輪(lún)換(huàn)使用的必要性尚存爭議,但FDA的監(jiān)管引文中主導應進行消毒劑(jì)輪換,但消毒劑(jì)的輪換使用周期應以曆史環境監測數據為基礎製(zhì)訂(dìng)。微生物對(duì)消毒劑的耐受性較抗生素要低一些,因為消毒劑比抗生素有更強的殺菌作用。另外使用(yòng)高濃度的消毒劑來(lái)殺滅少量的微生(shēng)物通常影響不大,因此應考慮選擇合適的消毒劑來對抗不斷增強的耐受性。同時建議定期進行試驗證明或評估從(cóng)環境菌監測中分離出的微生物(含已知及新的類型)對(duì)該(gāi)環境使用消毒劑的敏感性。
b)規範及安(ān)全使用
在消毒劑的使用過程中,人(rén)員培訓及是否規範(fàn)及安全使用該消毒劑對其應用(yòng)有很大影響。接觸消毒劑的人(rén)員要求進行微生物、清潔滅菌操作、消毒劑的製備/使用/安全處理(lǐ)廢(fèi)棄稀釋及濃縮消毒劑的培訓。如正確配製消毒劑是關鍵,很多消毒效果不佳或失敗的例子源於消(xiāo)毒劑的過度稀釋,另外用於無菌操作流程的消(xiāo)毒劑必須用無菌水稀釋,一般稀釋用水推薦純化(huà)水(shuǐ)及更高級別的(de)水,因為水的硬度會影響一些消毒劑的功效(xiào)。另外在處理可(kě)能產生有毒刺激性氣體、腐蝕性較強及濃度較大的消(xiāo)毒劑(如殺孢子劑)時,應配備適宜的安全(quán)防護裝備,如安全眼鏡、麵罩、過濾氣味(wèi)的口罩、手套、防(fáng)護服等。在消毒劑的使用同時應考慮清潔劑的配(pèi)合使用,清潔是去除表麵(miàn)顆粒及微生物(wù)、去除殘留並提高後續消毒效果,因(yīn)此清潔是為(wéi)後續的消毒做好(hǎo)準備,同時規避前後2種輪換消毒劑(jì)的互相作用。
2、滅菌
1)物理滅菌法
(1)熱(rè)力滅菌(jun1)法 使用熱力滅菌法,在(zài)溫度和壓力等規定的(de)滅菌條件下,要達到一(yī)定的加熱時(shí)間。包括:①火焰滅菌法是利用火焰(yàn)加熱殺滅微生物的一種方法,適用於(yú)磁製(zhì)品與金屬製品及(jí)在火焰中(zhōng)不會破損的物(wù)品;②幹熱滅菌法(fǎ)是利用幹熱空氣殺滅微生物的(de)一(yī)種(zhǒng)方法,適用於耐熱、不耐濕的物品,如玻璃器材、油劑類和幹(gàn)粉類等(děng);③高壓蒸汽滅菌法是利用適當溫度和壓力的飽和水蒸氣加熱殺滅微生物的一種方法,適用於耐高溫高壓(yā)水蒸氣的物(wù)品的滅菌;④流通蒸汽滅菌(jun1)法適用於有變質危(wēi)險(xiǎn)的物品;⑤煮沸滅菌法是利用沉沒在沸騰水中加熱(rè)殺滅微生物的一種方法(fǎ),煮沸時間應在15分鍾以上;⑥間歇滅菌法利(lì)用(yòng)80℃~100℃水或流通水蒸氣,24小時為一(yī)周期,每隔(gé)30~60分(fèn)鍾反複(fù)加熱(rè)3~5次(cì),適用於橡膠品、培養基、試驗用藥品、液體等。
(2)過濾滅菌法 過濾滅菌法是用篩除或濾材吸附等物理方(fāng)式除去微生物,是一種常用的滅菌方法,適用於不能受熱的物品(pǐn),如含有可溶性或(huò)不穩定物質的培養基、試驗(yàn)液體和液狀(zhuàng)醫藥(yào)品等,過濾法的最(zuì)大缺點(diǎn)是不能濾除病(bìng)毒。
(3)照射(shè)滅菌法 ①放射(shè)線滅菌法是包括放射(shè)性同位素在內,利用從放射(shè)源產生射線進行照(zhào)射,是殺滅(miè)微(wēi)生物(wù)的一種方法(fǎ),適用於(yú)玻璃製(zhì)品、磁製品、金屬製品、橡膠製品、塑料製品與纖維製品等耐受放射線照射的物品(pǐn);②紫外線(xiàn)滅菌法是利用照射紫外線殺滅微生物的(de)一種方法,適用於玻璃製品(pǐn)、金屬製品、橡膠製品、塑料(liào)製品和(hé)纖維製品等,還(hái)可(kě)用於設施、設備、水或醫藥品等。
2)化學滅菌法
(1)氣(qì)體滅(miè)菌法 氣(qì)體滅菌法是利(lì)用環氧乙烷或甲醛滅殺微生物(wù)的一種方法,主要用於玻(bō)璃製(zhì)品、磁(cí)製品、金屬製品、橡膠製品、塑(sù)料製品(pǐn)、纖維製品等,還可用於設施(shī)、設備或粉末狀的(de)醫藥品等(děng)。使用氣體滅菌時(shí),其被滅菌的(de)物品以未變質為前提條件(jiàn)。
(2)藥液滅(miè)菌法 通(tōng)常使用(yòng)的藥液有乙醇、甲酚、苯酚水或(huò)福爾馬林水等,適用於玻(bō)璃(lí)製(zhì)品、磁製品、金屬製品、橡膠製品、塑料製品(pǐn)、纖維製品等物品,還可用於手指、無菌箱或無菌設備等。
3)高(gāo)壓蒸(zhēng)汽滅(miè)菌法
(1)需要滅菌的(de)各種包裹不應過大、過緊(jǐn),不要排得太密集(jí),以免影響滅菌效果。
(2)包內和包外各貼一條滅菌指示帶(長6~8cm),如壓力達到範圍時,指示(shì)紙(zhǐ)帶上即出現(xiàn)黑色條紋,表(biǎo)示已達滅菌的要求。
(3)易燃和(hé)易爆炸物品(pǐn)如碘仿、苯類等,禁(jìn)用高壓蒸汽(qì)滅菌法;銳利器械(xiè)如刀、剪不宜用此(cǐ)法滅菌,以免變鈍。
(4)瓶裝液體滅菌時,要(yào)用玻璃紙和紗布包紮瓶口,如用橡皮塞的,應插(chā)入(rù)針頭排氣。
(5)要有專人負責,每次滅菌前,應檢查安全閥的性能是否良好(hǎo),以防鍋內壓力過高,發生爆炸。
4)個人防護
(1)熱力滅菌 幹熱滅菌時應防止燃燒;壓力蒸汽滅菌應防止(zhǐ)發生爆炸事故及可能對操作人員造成的灼傷事故。
(2)紫外線、微波消(xiāo)毒(dú) 應避免(miǎn)對人體的直接照射。
(3)氣體化學(xué)消毒劑 應防止有毒(dú)有害消毒氣(qì)體(tǐ)的泄漏,經常檢測消毒環(huán)境中該類氣體的濃度,確保在國家規定的安全範圍之內;對環氧乙烷氣體消毒劑,還應嚴防發生燃(rán)燒和爆炸事(shì)故。
(4)液體化學消毒劑 應防止過敏和可能對皮膚、黏膜的損傷。
(5)處理銳利器械和用具 應采取有效防護(hù)措施,以(yǐ)避免(miǎn)可能對人體的刺、割等傷害。
5)其他
已滅菌的物品應做記號,以便識別,並需與(yǔ)未滅菌的物品分開放置,以免弄錯。
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